藥物穩定性研究的實驗原理和注意事項

藥品的穩定性是指其保持理化性質和生物學特性不變的能力。若藥品的穩定性差，發生降解而引起質量變化，則不僅可能使藥效降低，而且生成的雜質還有可能有明顯的毒副作用，影響藥品使用的安全性與有效性。

穩定性試驗的目的是考察原料藥或藥物制劑在溫度、濕度、光線的影響下隨時間變化的規律，為藥品的生產、包裝、貯存、運輸條件提供科學依據，同時通過試驗建立藥品的有效期，保證用藥安全。

一、穩定性試驗基本要求

要求1: 影響因素試驗用1批供試品進行（原料藥或制劑）。加速試驗與長期試驗要求用3批供試品進行。

要求2: 原料藥供試品應是達到一定規模生產的產品。供試品量相當于制劑穩定性試驗所要求的批量;原料藥合成工藝路線、方法、步驟應與大生產一致。

要求3: 藥物制劑供試品應是放大試驗的產品，其處方和工藝與大生產一致。藥物制劑，如片劑或膠囊劑，每批放大試驗的規模，至少應為10000片或粒。大體積包裝的制劑，如靜脈注射液等，每批放大規模的數量至少應為各項試驗所需總量的10倍。特殊品種、特殊劑型所需數量，根據具體情況另定。

要求4: 供試品的質量標準應與臨床前研究及臨床試驗和規模生產所使用的供試品質童標準一致。

要求5: 加速試驗與長期試驗所用供試品的包裝應與上市產品一致。原料藥所用包裝應采用模擬小桶，但所用材料與封裝條件應與大桶一致。實驗室規模的產品僅可用作輔助性穩定性預試驗。

要求6: 研究藥物穩定性，要采用專屬性強、準確、精密、靈敏的藥物分析方法與有關物質(含降解產物及其他變化所生成的產物)的檢查方法，并對方法進行驗證，以保證藥物穩定性結果的可靠性。在穩定性試驗中，應重視有關物質，特別是降解產物的檢查和鑒定。

要求7: 由于放大試驗比規模生產的數量要小，故藥品注冊申請人應在獲得批準后，從放大試驗轉人規模生產時，對最初通過生產驗證的3批規模生產的產品仍需進行加速與長期穩定性試驗。

二、原料藥物與藥物制劑的穩定性試驗

1、原料藥物

（1）影響因素試驗

影響因素試驗是將藥品置于比加速試驗更為劇烈的條件下進行的穩定性考察。其目的是探討藥物的固有穩定性，了解影響其穩定性的因素及可能的降解途徑與降解產物，為制劑生產工藝、包裝，、貯存條件和建立降解產物分析方法提供科學依據。當試驗結果發現降解產物有明顯的變化，應考慮其潛在的危害性，必要時應對降解產物進行定性或定量分析，匯智泰康可提供降解產物推斷與含量檢測服務。

(2）加速試驗

此項試驗是在加速條件下進行。其目的是通過加速藥物的化學或物理變化，探討藥物的穩定性，為制劑設計、包裝、運輸、貯存提供必要的資料。

(3）長期試驗

長期試驗是將藥物置于接近實際貯存的條件下進行的穩定性考察，目的是為制訂藥物的有效期提供依據。

2、藥物制劑

藥物制劑穩定性研究，首先應查閱原料藥物穩定性有關資料，特別了解溫度、濕度、光線對原料藥物穩定性的影響，并在處方篩選與工藝設計過程中，根據主藥與輔料性質，參考原料藥物的試驗方法，進行影響因素試驗、加速試驗與長期試驗。

（1）影響因素試驗

藥物制劑進行此項試驗的目的是考察制劑處方的合理性與生產工藝及包裝條件。

（2）加速試驗

此項試驗是在加速條件下進行，其目的是通過加速藥物制劑的化學或物理變化，探討藥物制劑的穩定性，為處方設計、工藝改進、質量研究、包裝改進、運輸、貯存提供必要的資料。

（3）長期試驗

長期試驗是在接近藥品的實際貯存條件下進行，其目的是為制訂藥品的有效期提供依據。

三、穩定性重點考察項目

原料藥物及主要劑型的重點考察項目見附表，表中未列人的考察項目及劑型，可根據劑型及品種的特點制訂。

注：有關物質（含降解產物及其他變化所生成的產物）應說明其生成產物的數目及量的變化，如有可能應說明有關物質中何者為原料中的中間體，何者為降解產物，穩定性試驗重點考察降解產物。

四：穩定性試驗的分析方法與要求

適用于藥物穩定性試驗樣品質量檢測的分析方法稱為穩定性指示分析法。穩定性指示分析法應該能夠準確檢測出藥物原料和制劑的質量隨著穩定性試驗考察因素的作用和時間的延長而可能出現的變化。穩定性指示分析法應能夠不受降解產物、工藝雜質、賦形劑或其他潛在雜質的影響，而準確測定藥物中的活性成分，并能夠定性和（或）定量地監測藥物中的雜質（包括降解產物）。

穩定性試驗中所用的含量測定方法應當具備穩定性指示能力。如果所用含量測定方法的專屬性不能滿足穩定性試驗的要求，則必須增加能夠進行雜質(包括降解產物)定性和定量監測的分析方法對其進行補充。所以，常用的穩定性指示分析法主要是色譜分析法，如PLC，HPTLC等。穩定性指示分析法建立時，為了保障其適用性，通常均要求在試驗樣品的制備、分析條件的建立和試驗方法的驗證3個方面進行全面的試驗研究。

1、試驗樣品的制備

試驗樣品包括：起始原料、中間體，粗品原料、藥物成品，以及將藥物經過破壞（苛性）處理使主成分含量下降約5%~20%而包含分降解產物的樣品。對于復方制劑，則需要對各藥效成分既分別又合并進行破壞處理。

常用的破壞處理方法是將藥物固體和（或）其適宜的溶液置于比加速和影響因素試驗更為劇烈的條件下進行破壞，生成分降解產物。這樣既可以滿足考察穩定性指示分析法適用性的需要，又可以建立藥物的分降解行為與途徑，鑒定可能的分降解產物，并獲得藥物的內在穩定性特征。

從而為預測藥物在貯藏過程中可能出現的分降解產物，并為藥物的生產制備工藝、制劑處方工藝、包裝與貯藏等條件的優化與建立提供參考。

藥物的化學結構不同，理化性質有差異，其分降解行為也常常不同。水解、氧化、異構化或聚合等，是藥物分降解的主要途徑，并有可能出現多途徑降解。所以，常用的破壞處理方法包括水解、氧化、高溫和光照等。當藥物在通常的溶劑條件下的溶解度不合適時，還可以添加適宜的有機溶劑助溶，以便有效地產生分降解反應。

破壞處理時，需同時制備:空白溶劑或輔料、平行破壞處理的空白溶劑或輔料、未經破壞處理的樣品、平行破壞處理的單組分樣品，以便識別和鑒定分降解產物及其來源。并可適當增減調整破壞處理的程度，以便獲得破壞程度適宜的降解樣品。對于具有手性、多晶型或順反異構的藥物，還須特別考察破壞處理過程中的手性、晶型或異構的轉化。

2、分析方法的建立

常用的穩定性指示分析法均為具有良好分離能力和專屬性的色譜方法。為了檢驗穩定性指示分析法的專屬性和適用性，應采用起始原料、中間體、粗品原料及藥物經過破壞處理生成分降解產物的樣品，進行分離效能的考察，確保所使用的方法滿足藥物中活性成分的專屬與準確測定要求，滿足有關物質的定性和（或）定量檢査的要求。

所以，在穩定性指示色譜測定條件的建立過程中，必須對主成分峰以及需要逐一進行定量測定的所有特定雜質峰，分別采用適宜的手段進行專屬性的確證。專屬性確證常用的方法包括：色譜峰純度PDA或MS鑒定的直接檢查法；改變色謂條件或色譜系統，考察和比較色譜峰分離的間接檢查法；以及添加雜質對照的驗證檢查法。

由于分降解產物與藥物活性成分常常具有明顯的理化和色譜行為差異，所以，在藥物雜質檢查和穩定性指示分析測定中，梯度HPLC 的使用巳變得越來越廣泛。例如，ChP中阿司匹林的有關物質檢查，自ChP2010即采用了梯度HPLC，而在ChP2005相應標準中，除游離水楊酸外，沒有進行有關物質的檢查。

當然，穩定性指示分析法并不一定要使破壞產生的所有分降解產物均能夠獲得專屬的分離。尤其是那些已經證明在加速和長期穩定性試驗中不可能產生的雜質，在穩定性指示分析法建立時，可以不予考慮。

匯智泰康分析方法建立步驟：

• 1）了解樣品的性質-化合物的化學結構、分子量、PKa值、溶解度等；
• 2）確定定性還是定量—涉及標準品的準備（若是定量，需提前準備好標準品）
• 3）樣品的預處理：根據來源形式不同，可能有如下幾種形式①可直接進樣；②需稀釋或加入內標等其他操作；③需要溶解或提取處理的固體。
• 4）上機檢測

3、試驗方法的驗證

匯智泰康可根據穩定性指示分析法的類型不同，分別對方法的專屬性、線性和范圍、精密度、準確度、靈敏度和耐用性等進行必要的驗證，結果應與選用方法的類型相適宜。

參考材料：

1、原料藥物與制劑穩定性試驗指導原則

2、藥品注冊管理辦法（局令第28號）附件二